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对酶的测定十分重要,过高虽然测定的线性较宽,但重复性差,反之精密度虽好,但检测线性窄,因此应根据实际情况进行合理的设置和应用。但是在临床实际工作中,仪器诸多因素如波长的准确性半波宽的大小比色杯光径及磨损与清洁度温控的准确性加样系统状况等若不符合要求或发生变化都会影响指示物的ε值或上述公式中的相关项,因此应在具体仪器条件下,定期检查和实际测定指示物的实测ε值和F值。因为纯NADPH溶液不稳定,所以NADPH的ε值需用葡萄糖己糖激酶法实测,实际操作为将某一浓度的葡萄糖溶液重复-次测定,得到相应的一组吸光度A值,求出Aˉ±s,注意s必须低于规定的批内允许值,再根据下面两个公式分别计算出NADPH的实测ε值和F值式中C为标准液浓度mol/L。
其他一些色素源指示物在不同的介质环境中,其ε值会发生程度不等的变化,对-硫代--硝基苯甲酸对硝基苯酚对硝基苯胺等这些可得到高纯而稳定的指示物,可将其配制在一定的介质中,按临床标本用的现场试剂和仪器测定吸光度求实测ε值及F值。线性度是非线性比率的界线,常用%表示,其计算公式为,式中k为连续监测时间/内前读数时间的斜率,k为后/读数时间的斜率,k为总的斜率,一般设置为%。对一些酶活性项目,可以适当放宽,当不需要设置检查界限时,设置其为。
线性百分数大,说明Δk之间已不成线性;超过极限值说明底物不足,检测结果会变低,应稀释后重测。底物耗尽限额选择连续监测法或两点终点法时设置,不同型号分析仪的设计不一样,有的为零点与监测点吸光度的差额,有的为吸光度上升或下降至指定吸光度MAX-OD/MIN-OD的数值。超过限额说明样品的酶活性非常高,底物消耗太快,在仪器程序规定的线性反应期内吸光度的变化往往不代表真正的酶活力,导致结果偏低,该样品应稀释一定的倍数重新测定。
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准确度等级一般以该计址标准所符合的等别或级别表示,可以按各专业的规定填写,例如可以写为"等","O级”本栏中的不确定度,是指川该计址标准检定或校准被测对象时,该计扯标准在测址结果中所引入的不确定度分从其中不应包括由被测对象测方法以及环境条件等对测扯结果的影响,例如由环境效应导致的被测对象的不稳定,或由千被测对象和计量标准之间的失配而对测址结果的影响。当埴写不确定度时,司以根据该领域的习惯和方便的原则,用标准不确定度或扩展不确定度来表示。标准不确定度用符号表示;扩展不确定度有两种表示方式,分别用U和UP表示,与之对应的包含因子分别用K和KP表示。当用扩展不确定度表示时,应同时注明所取包含因了的数值。不确定度数值前不带”土”号,也不能用,表示。当包含因子的数值是根据被测址的分布,并由规定的包含概率计算得到时,扩展不确定度用符号,表示,与之对应的包含因子用KP表示。
具体地说,当规定的包含概率p分别为或时,分别用符号焊或表示。当包含因子的数值是直接取定在绝大多数悄况下取而不是根据被测批y的分布计算得到时,扩展不确定度用符号U表示,与之对应的包含因子用K表示。填写本栏目时,应根据计扯标准的具体情况填写不同的参数。若计屈标准简单地由单台仪表或扯具组成O若在检定或校准中贞接采用该仪表或扯具的示值或标称值,即不加修正值使用,则填写该仪表或批具的大允许误差;若在检定或校准中,该仪表或队具需要加修正值使用,即采用其实际值,则填写该修正值的不确定度;若该仪表或埽具有汁I确度等别和或级别的规定,则也可以填写该仪表或址具的等别和或级别。
使用等别,相当于用不确定度来表示;使用级别,相当千用大允许误差表示。若计蚊标准由多台仪表或测肚设备组成的一套系统,则在原则上可以将计址标准分成计阰标准器和比较器两部分第二章建标指导若可以分辨这两部分各自对测扯结果的影响,则按上面的原则分别填写这两部分的有关参数不确定度或准确度等级或大允许误差。当比较器是由多种设备构成时,则填写这些设备的合成不确定度;若无法分辨这两部分各自对测扯结果的影响,则直接填写上述两部分的合成不确定度。
无论采用何种方法来表示,均应明确用符号表明所提供数据的含义。对于可以测址多种参数的计址标准,应分别给出每种参数的测址不确定度或准确度等级或大允许误差。对千不同测址点或不同测扯范闱,计标准具有不同的测扯不确定度时,则应该分段给出其不确定度,以每一分段中的大不确定度表示。如有可能,好能给出测鼠不确定度随测扯点变化的公式。若对千不同的分度值,计扯标准的不确定度不同时,应该分别给出对应于每一分度值的不确定度。
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