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对酶的测定十分重要,过高虽然测定的线性较宽,但重复性差,反之精密度虽好,但检测线性窄,因此应根据实际情况进行合理的设置和应用。但是在临床实际工作中,仪器诸多因素如波长的准确性半波宽的大小比色杯光径及磨损与清洁度温控的准确性加样系统状况等若不符合要求或发生变化都会影响指示物的ε值或上述公式中的相关项,因此应在具体仪器条件下,定期检查和实际测定指示物的实测ε值和F值。因为纯NADPH溶液不稳定,所以NADPH的ε值需用葡萄糖己糖激酶法实测,实际操作为将某一浓度的葡萄糖溶液重复-次测定,得到相应的一组吸光度A值,求出Aˉ±s,注意s必须低于规定的批内允许值,再根据下面两个公式分别计算出NADPH的实测ε值和F值式中C为标准液浓度mol/L。
其他一些色素源指示物在不同的介质环境中,其ε值会发生程度不等的变化,对-硫代--硝基苯甲酸对硝基苯酚对硝基苯胺等这些可得到高纯而稳定的指示物,可将其配制在一定的介质中,按临床标本用的现场试剂和仪器测定吸光度求实测ε值及F值。线性度是非线性比率的界线,常用%表示,其计算公式为,式中k为连续监测时间/内前读数时间的斜率,k为后/读数时间的斜率,k为总的斜率,一般设置为%。对一些酶活性项目,可以适当放宽,当不需要设置检查界限时,设置其为。
线性百分数大,说明Δk之间已不成线性;超过极限值说明底物不足,检测结果会变低,应稀释后重测。底物耗尽限额选择连续监测法或两点终点法时设置,不同型号分析仪的设计不一样,有的为零点与监测点吸光度的差额,有的为吸光度上升或下降至指定吸光度MAX-OD/MIN-OD的数值。超过限额说明样品的酶活性非常高,底物消耗太快,在仪器程序规定的线性反应期内吸光度的变化往往不代表真正的酶活力,导致结果偏低,该样品应稀释一定的倍数重新测定。产品细节河南漯河仪器校准产品生产注重细节,精心选择原材料,精湛的河南漯河仪器校准生产流程
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